雙槽梯度PCR儀應(yīng)該這樣使用

　　雙槽梯度PCR儀的反應(yīng)原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火（復(fù)性）--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：

　　①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；

　　②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至40~60℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；

　　③引物的延伸：DNA模板一引物結(jié)合物在DNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性一退火一延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘，2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。

　　雙槽梯度PCR儀根據(jù)樣品槽的不同還可分為空氣浴型和金屬樣品槽型。前者樣品管架在空氣浴中，通過氣流的變溫實(shí)現(xiàn)PCR熱循環(huán)；后者樣品管放置在金屬樣品槽孔中，通過金屬樣品槽的變溫實(shí)現(xiàn)PCR熱循環(huán)。近年來，在各種方案基因擴(kuò)增儀的基礎(chǔ)上，通過結(jié)構(gòu)改變又派生出各種新型的PCR儀。例如，為了防止樣品管中試劑的揮發(fā)，在樣品槽上加一熱蓋，形成了蓋加熱型PCR儀；為了進(jìn)行原位雜交，設(shè)計(jì)能放置載玻片的樣品槽，形成原位PCR儀；為了加速PCR反應(yīng)、節(jié)省試劑、提高特異性，用毛細(xì)管代替離心管，形成了毛細(xì)管型快速PCR儀。